胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)是蛋白酶的一種,EC3.4.21.4。是以無活性的酶原形式存在于動物胰臟中,在Ca2+的存在下,被腸激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,從肽鏈N端賴氨酸和異亮氨酸殘基之間的肽鍵斷開,失去一段六肽,分子構(gòu)象發(fā)生一定改變后轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌浮V泛用于各種生物技術(shù)過程中,如:蛋白質(zhì)或多肽的生產(chǎn);蛋白質(zhì)的酶解;蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能研究;各種組織的細(xì)胞分離等。
動物胰蛋白酶
最初胰蛋白酶主要從豬、牛的胰臟中提取,但因其動物源性,存在未知病毒(如非洲豬瘟病毒和瘋牛病朊病毒等)和外源因子污染的風(fēng)險,且常因分離純化不徹底,存在其它酶類(如糜蛋白酶等,對底物的特異性切割賴氨酸和精氨酸位點(diǎn)產(chǎn)生影響,故此種方法產(chǎn)生的胰蛋白酶在胰島素等蛋白藥物的生產(chǎn)和分析中的應(yīng)用受到較大的限制。
從動物胰臟中提取胰蛋白酶時,一般是用稀酸溶液將胰腺細(xì)胞中含有的酶原提取出來,再沉淀除去大量的酸性雜蛋白以及非蛋白雜質(zhì),再分級鹽析將胰蛋白酶原等(包括大量糜蛋白酶原和彈性蛋白酶原)沉淀析出。經(jīng)溶解后,以極少量活性胰蛋白酶激活,使其酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘囊鹊鞍酌福拥鞍酌负蛷椥缘鞍酌竿瑫r也被激活),被激活的酶溶液再以鹽析分級的方法除去糜蛋白酶及彈性蛋白酶等組分。收集含胰蛋白酶的級分,并用結(jié)晶法進(jìn)一步分離純化。
重組胰蛋白酶
為了避免已知的動物源污染和未知的污染,重組胰蛋白酶應(yīng)運(yùn)而生,通過基因重組技術(shù)獲得工程菌來表達(dá)胰蛋白酶原,可以產(chǎn)生高純度與高活力的胰蛋白酶,滿足蛋白質(zhì)研究與藥物蛋白生產(chǎn)的需要,同時又避免了外源因子污染的風(fēng)險。
制備重組胰蛋白酶需要培養(yǎng)包含胰蛋白酶原基因的工程菌并誘導(dǎo)胰蛋白酶原基因表達(dá),對得到的包涵體形式的蛋白進(jìn)行一系列變復(fù)性和純化處理,最終得到具有活性的胰蛋白酶。
重組胰蛋白酶生產(chǎn)過程中不使用動物源成分,因此不會具有動物病毒和外源因子污染的風(fēng)險。
冀百康重組胰蛋白酶
重組胰蛋白酶(生物化學(xué)級)
本品系重組酵母菌表達(dá)、經(jīng)多步分離純化后冷凍干燥制成,具有天然豬胰蛋白酶相同的活力和特異性。本品生產(chǎn)過程中未使用任何動物源的材料,非常適合代替動物提取的胰蛋白酶。
本品為國家高新技術(shù)產(chǎn)品,且已申請國家發(fā)明專利CN201811428317.X
重組胰蛋白酶(細(xì)胞培養(yǎng)級)
冀百康在重組胰蛋白酶(生物化學(xué)級)基礎(chǔ)上,改進(jìn)純化技術(shù)和凍干方法,全新推出細(xì)胞培養(yǎng)專用的重組胰蛋白酶,特別適合各種動物細(xì)胞的消化。