重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術生產(chǎn)的酶。它是胰蛋白酶的一種形式，是在實驗室中合成的，而不是從動物來源（例如豬或牛的胰腺）中提取的。冀百康生物——重組胰蛋白酶，在整個生產(chǎn)流程中，嚴格避免了使用任何動物源性原材料，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風險，確保了該重組胰蛋白酶產(chǎn)品的安全性、高純度及超高比活等特性。
*動物源與非動物源胰蛋白酶的對比
重組胰蛋白酶具有許多潛在用途，包括應用于在醫(yī)藥開發(fā)、用作研究工具以及生物技術應用，例如蛋白類藥物的生產(chǎn)、細胞消化、疫苗生產(chǎn)以及用于細胞分析的組織樣本的制備等，總體而言，重組胰蛋白酶在生物制藥和科研領域是不可或缺的關鍵酶。
*酶
為滿足下游企業(yè)在生物藥以及科研領域的不同應用需求，冀百康生物提供出四款級別的重組胰蛋白酶可供選擇，分為重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶、重組胰蛋白酶（細胞培養(yǎng)級）、重組胰蛋白酶（藥典級）、重組胰蛋白酶（1:250）。
*冀百康重組胰蛋白酶
*具體產(chǎn)品信息可聯(lián)系業(yè)務人員。
選型指南
面對多種多樣的重組胰蛋白酶，下游如何選購才更精準？請參考冀百康生物為您提供的詳盡選型指南。
01 應用于細胞消化，疫苗生產(chǎn)
重組胰蛋白酶（細胞培養(yǎng)級）
重組胰蛋白酶（細胞培養(yǎng)級）在疫苗生產(chǎn)的環(huán)節(jié)中作為細胞消化的工具介入，尤其是貼壁依賴型動物細胞的消化。在細胞培養(yǎng)的過程中，使用重組胰蛋白酶（細胞培養(yǎng)級）對貼壁細胞進行處理，能夠快速水解細胞間的沾粘蛋白，釋放出單個獨立細胞。高純度的細胞培養(yǎng)級無雜蛋白/雜酶等，可以減少對細胞的非特異性影響，提高消化過程的特異性和溫和性，保持細胞的完整性和細胞活性。同時，細胞培養(yǎng)級具有超高的比活性，能提升消化效率，更快速地處理細胞樣本。
* 胰蛋白酶消化前后對比
（來源：分析測試百科網(wǎng)《細胞消化的小技巧》）
● 不含凍干保護劑，高純度 (SDS-PAGE) ≥95%，蛋白含量≥90%；
● 更高比活性，通?！?500USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA
02 應用于蛋白質(zhì)分析與純化
重組胰蛋白酶（藥典級）
重組胰蛋白酶（藥典級）符合美國藥典USP42和中國藥典2020版中重組胰蛋白酶相關標準，更適合常規(guī)的蛋白質(zhì)分析與純化。藥典級純度≥95%，可以精準快速地將大分子的蛋白質(zhì)的切割成較小的片段或肽鏈，避免雜質(zhì)或其他蛋白質(zhì)影響，提高蛋白質(zhì)的純度。另外，藥典級超高比活的優(yōu)勢，可在較短的時間內(nèi)實現(xiàn)完全酶解，減少樣品的周轉(zhuǎn)時間，加快蛋白質(zhì)分析與純化過程；減少了非特異性切割和酶自身降解的可能性，從而保證了蛋白類藥物的質(zhì)量和均一性。
*蛋白質(zhì)全譜分析示意圖
（來源：武漢國家級人類遺傳學資源庫)
● 含凍干保護劑，高純度≥95%，蛋白含量＞50%；
● 更高比活性，通?！?000USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA
03 應用于生物藥物生產(chǎn)，如胰島素
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶因其在高溫條件下依舊維持活性的特性，可完美規(guī)避在使用重組胰蛋白酶過程中反復凍融而造成的損耗。本品不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。與重組豬胰蛋白酶等不同，該重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶不易自切，配制為細胞消化液后可在2-8℃穩(wěn)定存放，在胰島素的生產(chǎn)過程中，重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶常用于胰島素前體蛋白的酶切轉(zhuǎn)換步驟，將胰島素前體蛋白轉(zhuǎn)化為活性胰島素。重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶的高熱穩(wěn)定性和高比活性有助于在溫和的條件下進行高效酶切，減少副產(chǎn)物的生成。
*人胰島素、甘精胰島素和谷賴胰島素的前-胰島素原的主要胰蛋白酶切割位點圖。
(來源：冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應用[J]. 中國藥學(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)
● 高純度≥95%，蛋白含量＞30%
● 不易自切，穩(wěn)定性較高
● 更高比活性，通?！?500USP units/mg pro.，每批次不同，詳見COA
04 應用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細胞解離
重組胰蛋白酶（1:250）
重組胰蛋白酶（1：250）具有良好的消化性，可以有效地破壞細胞粘附和從組織中解放細胞，常應用于疫苗生產(chǎn)中初生組織解離中的細胞解離。1：250中含有EDTA，能抑制金屬依賴性酶，促進細胞間連接的破壞，加快組織細胞剝離。
*動物細胞培養(yǎng)過程
(來源：生物器材網(wǎng)《哺乳動物細胞培養(yǎng)過程&培養(yǎng)條件》)
# 應用案例
推薦使用方法
重組胰蛋白酶（細胞培養(yǎng)級）
● 溶液配制：重組胰蛋白酶室溫下融化，取適量胰蛋白酶，加入HBSS平衡液（或其他適宜細胞消化的緩沖液，如需要加入EDTA其終濃度推薦 0-1mM，最好不超過2mM），推薦一般使用的胰蛋白酶濃度約為 0.1-0.3mg/ml（濃度根據(jù)不同細胞進行調(diào)整），輕柔混勻；該步驟可在室溫環(huán)境操作；
● 使用0.22μm濾膜對上述胰蛋白酶溶液過濾并轉(zhuǎn)移至無菌容器中；該步驟可在室溫環(huán)境操作；
● 過濾后的胰蛋白酶溶液應在當天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化細胞）
重組胰蛋白酶（藥典級）
● 蛋白質(zhì)的準備——將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl，pH8.0的溶液中。
● 酶液準備——稱取所需的酶粉，用10mM HCl 溶解，使酶液濃度為1-10mg/ml。
● 反應條件——酶量：目的蛋白（質(zhì)量比）=1:50-1:1000，最適pH為7.0~9.0
重組熱穩(wěn)定胰蛋白酶
● 蛋白酶切
1）將蛋白質(zhì)溶解在25mM Tris-HCl（pH7.0-10.0）緩沖液中。
2）將酶粉用1mM HCl（或25mM Tris-HCl，pH8.0）溶解，使酶液濃度為1-10mg/ml。
3）按照酶量：目的蛋白=1mg:50mg-1mg:500mg，或者酶量：目的蛋白=10U:1mg-100U:1mg,在pH 7.0-10.0條件下酶切。
● 細胞消化
1）取酶粉，用HBSS平衡液（或其他適宜細胞消化的緩沖液，如需要加入 EDTA 其終濃度推薦0-1mM，最好不超過2mM），配制為蛋白濃度0.1-0.3mg/ml（或者酶活濃度300U/ml-1000U/ml）的消化液，輕柔混勻。
2）使用 0.22μm 濾膜對上述胰蛋白酶溶液過濾并轉(zhuǎn)移至無菌容器中。
3）該消化液可當天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化細胞），也可在2-8℃條件下保存30天。（若需在2-8℃保存更長時間，可購買我公司產(chǎn)品TrypRE select?；蚺c我公司技術人員聯(lián)系。）
重組胰蛋白酶（1:250）
● 取0.25g重組胰蛋白酶（1：250）粉末，加入100ml HBSS平衡鹽溶液制成0.25%的溶液，在室溫下攪拌溶解約 10min。
● 用磷酸和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.4-7.8之間，用0.22μm膜過濾，置于-20℃下保存。
# 說明：
1、處理難消化細胞，可配制為 0.4-1.0%溶液。
2、HBSS平衡鹽溶液配方：400mg/L KCl，60mg/L KH2PO4，350mg/LNaHCO3，8000mg/LNaCl，121mg/L Na2HPO4·12H2O，1000mg/L葡萄糖
*參考文獻
1.《中國藥典》2020版——重組胰蛋白酶檢測要求公示
2.冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重組酶在胰島素生產(chǎn)中的應用[J]. 中國藥學(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)
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